茶树咖啡碱合成酶基因原核表达、及其抗体制备与鉴定

【类型】期刊

【基金项目】安徽省高等学校省级自然科学研究项目（重点项目kj2012a114）；安徽省自然科学基金青年科学基金项目（1208085qc53）；长江学者和创新团队发展计划（irt1101）；国家自然科学基金课题（31170649）

【作者】邓威威 金阳 李旻 马林龙 张正竹 

【关键词】 原核表达 茶树 咖啡碱合成酶 咖啡碱 多克隆抗体

【刊名】植物研究

【出版日期】2015-01-01

【ISSN】1673-5102

【页码】333-339

【期号】第3期

【作者单位】安徽农业大学省部共建茶树生物学与资源利用国家重点实验室

【卷号】第35卷

【摘要】克隆出茶树咖啡碱合成酶基因,对其进行原核表达,并制备TCS1抗体,旨在从蛋白水平研究茶树体内TCS1的表达情况。根据Gen Bank登陆的TCS1基因的全长c DNA序列,找出其完整的ORF(开放阅读框),从茶树叶片c DNA中克隆了TCS1基因的开放阅读框,连接到p GEX-4T-2表达载体,经IPTG诱导表达重组蛋白p GEX-4T-2-TCS1。进行体外酶活检测后,亲和层析纯化重组蛋白,作为抗原免疫家兔,制备TCS1多克隆抗体。用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性。

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